Page 42 - Dược liệu thực hành

2. Định tính rutin trong nụ hòe bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng
Thời gian: 1 giờ
2.1 Chuẩn bị : Cho 1 nhóm từ 4-6 Sinh viên.

+ Bản mỏng: 3-5 bản mỏng kích thước 2x 10cm trắng sẵn Silica gel GF 254

Hoạt hóa 110oC trong 1 giờ, bảo quản trong bình hút ẩm.

+ Bình để chạy sắc ký lớp mỏng: 01 chiếc

+ Ống mao quản: 2-5 chiếc.

+ Đèn tử ngoại: 01 chiếc.

+ Dung môi khai triển: n- butanol- acid acetic- nước cất (4: 1: 5).

Dùng ống hút chính xác lấy: 4ml n- butanol, 1ml acid acetic, 5ml nước cất cho

vào bình chạy sắc ký, đậy nắp, để khoảng 1-3 phút cho bào hòa hơi dung môi.

+ Thuốc thử : amoniac đậm đặc.

+ Dung dịch thử: Dung dịch A

Lấy 0,5 g bột dược liệu, thêm 10 ml ethanol (TT). Đun sôi trong 3 phút, để

nguội, lọc. Dịch lọc (dung dịch A) dùng để chấm sắc ký lớp mỏng.

+ Dung dịch chuẩn: Hoà tan 5mg rutin trong 5ml ethanol 90% (TT) để được dung

dịch có chứa 1 mg/ml.
2.2 Cách tiến hành

+ Dùng ống mao quản chấm riêng biệt lên bản mỏng 20 l mỗi dung dịch trên.

+ Cho bản mỏng vào bình sắc ký đã bào hòa dung môi (lưu ý đặt bản mỏng tránh bị

lệch, dung môi không được ngập vết chấm). Quan sát dung môi chạy trển bản

mỏng đến khi vết dung môi chạy cách mét trên khoảng 0,5 cm thì nhấc bản mỏng

ra khỏi bình sắc ký.

+ Nhấc bản mỏng ra khỏi bình, để khô bản mỏng ở nhiệt độ phòng. Quan sát dưới

ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 366 nm, trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có

vết cùng phát quang màu nâu và cùng giá trị R f với vết rutin trên sắc ký đồ của

dung dịch đối chiếu. Hiện màu bằng hơi amoniac đậm đặc (TT), trên sắc ký đồ của

35